小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌中的表达与纯化
石小东, 胡蕊, 高灿
目的 将小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌细胞中进行表达与纯化,以便于研究与FN结构域相互作用的蛋白质。方法 以重组质粒GV287-EphB2作为模板,经PCR扩增,得到FN结构域的cDNA片段,并将其克隆至pET-28a载体中。将重组质粒pET-28a-FN转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE检测FN-His6融合蛋白的表达。最后采用Ni-NTA亲和层析法对该蛋白进行纯化。结果 本研究成功地构建了FN结构域的原核表达载体。经鉴定,FN-His6融合蛋白能够在大肠杆菌中表达。纯化后,得到少量可溶性FN-His6融合蛋白。结论 小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域可以在大肠杆菌中表达并纯化,为研究与FN结构域相互作用的蛋白奠定了实验基础。