磷酸胆碱聚合物载TGF-β1反义寡核苷酸转染血管外膜成纤维细胞对TGF-β1的影响
李菲, 王志荣, 张卓琦, 程明月, 张超群
目的 观察新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70能否有效地转染针对转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)的反义寡核苷酸(AS-ODN)进入到血管外膜成纤维细胞中及转染后对血管外膜成纤维细胞内TGF-β1表达的影响,为MPC30-DEA70聚合物作为药物基因治疗载体在心血管疾病中的运用奠定基础。方法 组织贴块法培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察MPC30-DEA70/TGF-β1AS-ODN(FAM标记)在细胞内的分布和定位;流式细胞仪(FCM)检测二者的细胞转染效率、荧光强度;免疫印迹实验(Western blot)检测TGF-β1细胞内表达。结果(1)原代培养的细胞呈纺锤形,多角形或者不规则形,细胞核较大,数量1~2个不等,轮廓清楚,核仁大而明显,呈椭圆形;(2)激光共聚焦显微镜观察到FAM标记的基因复合物多数分布在细胞核周围;(3)流式结果显示转染效率及荧光强度随N/P比增加而明显增大;(4)Western blot结果显示随着N/P比值的增大,TGF-β1的蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 MPC30-DEA70够携带TGF-β1-AS-ODN进入离体培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞,并能下调TGF-β1蛋白的表达。
:徐州医学院学报