肝细胞生长因子真核表达质粒的构建、鉴定及表达
李德鹏, 桑威, 李振宇, 黄一虹, 张奎, 徐开林
目的 克隆人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)的编码基因,构建真核表达载体,获得hHGF蛋白。方法 从含hHGF的人肝脏组织总RNA中,利用RT-PCR方法扩增出hHGF cDNA;利用TA克隆技术,将该基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1+质粒,转化E.coli DH5α细胞,鉴定pcDNA3.1+-hHGF重组质粒。将重组质粒pcDNA3.1+-hHGF转染293T细胞,应用ELISA方法检测hHGF在293T细胞中的表达。结果(1)测序结果证实本实验克隆的基因与人HGF基因序列一致。(2)重组质粒pcDNA3.1+-hHCF是具有表达功能的真核表达质粒。(3)pcDNA3.1+-hHGF转染293T细胞,于转染后12、24、48、72 h均能检测到hHGF表达。结论 成功构建hHGF真核表达载体,获得分泌性hHGF蛋白。